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猪小肠新法提取肝素钠
来源:chinahrlab.com  最后更新  2008-01-23

素是重要的生化药物,有抗凝血、降血脂作用,抗炎、抗过敏及抗病毒等生物效应。主要治疗弥漫性血管内凝血,防治血栓病和用于心脏手术体外循环,也是出口的重要生化药物。现在各生物药厂均以每公斤12000元左右的高价购买。有条件的乡村和农户可充分利用肝素钠的原料--猪小肠。

一、原料D254树脂(D204树脂)、新鲜肠粘膜、氯化钠(精盐)、丙酮(试剂级或工业级)、酒精(工业级,含量95%)、碱液(工业级,含量30--40%)、五氧化二磷(化学纯)。

二、操作

(一)盐解提取:取新鲜肠粘膜水50公斤(含固体4--6%),加盐4公斤,倒入反应锅内,加碱液(或固体碱)调至PH8。8--9,搅拌10分钟(保持PH值不变);在30分钟内升温至55度,保温2小时;然后在40分钟内继续升温至95度,恒温10分钟后出料,捞去上部废液。用90--120目尼龙网布过滤。滤渣进行两次提取,合并两次滤液。用肠衣盐卤为原料,先用干净水稀释至比重计或波美表测量达到标准的0。8--1N(即4。7--5。9%),再稀释4--5倍,调到PH9--9。5,其他操作同上。

(二)离子交换:将预处理好的树脂2。5公斤,投入温度为55度以内的水解液中,搅拌吸附6小时,提取树脂,弃去滤液,将收集的树脂在清水中洗至中性。

(三)洗涤和洗脱:用相当于树脂重量1。2倍的7%稀盐水搅拌洗涤2次,每次1小时,目的是洗去树脂表面的杂质分子和低分子肝素,弃去洗涤液,再进行洗脱,用相当于树脂重量1。2倍的17--18%浓盐水搅拌洗脱2次,头次6小时,二次2小时,目的是将树脂内吸附的肝素洗脱出来。收集这两次的洗脱液混合过滤,除去颗粒状杂质,待沉淀。洗脱温度应控制在200--25度。。

(四)沉淀:在过滤后的洗脱液内,加入相当于洗脱液体积的95%酒精,搅拌片刻,加盖密封,静态沉淀24小时,抽出上部酒精,收集底部的肝素钠放入瓶内。

(五)脱水、干燥:将沉淀物倒入小容器内,加入相当于沉淀物体积的95%酒精,静态沉淀24小时,抽出上部酒精,提取沉淀物放至布氏漏斗中真空,待真空上部开裂时,加丙酮至漏斗中搅拌成糊状,进行脱水,重复3次,利用丙酮将肝素中水分脱去。提取块状物,置于放有干燥剂(五氧化二磷)的干燥器内,定时更换干燥剂,直至五氧化二磷不吸水分为止,即得肝素粗品。

三、树脂的处理和酒精回收

(一)树脂的处理:(1)新树脂的处理。用清水拌洗2次,每次1小时,捞出沥干;再用50--55度温水拌洗2次,每次1小时,捞出沥干;用95%的酒精浸泡24小时,捞出沥干,在清水中洗至无酒气为止。用2倍树脂的4--5%稀盐酸水拌洗3小时,捞出树脂洗至中性沥干;用2倍树脂的10--11%稀盐酸水拌洗3小时,捞出树脂洗至中性沥干;再用2倍树脂的4--5%稀盐酸水拌洗3小时,捞出树脂洗至中性沥干;即得氯型树脂,备用。(2)旧树脂的处理。树脂用过3次,进行1次酸处理;第六次再进行1次酸处理,第九次进行酸碱盐处理。处理后的树脂应洗至中性,用21--22%浓盐水浸泡12小时备用。增加树脂的吸附能力。

(二)回收酒精:取用过的废酒精置于反应回收锅内,加盖密封,在盖的中心插入0--100度温度计,温度75度时出酒精,最高不得超过88度,保持3--4小时。用酒精表测定,低于45度的酒精不可再回收。

四、注重事项

(一)肠粘膜质量要好,必须采用新鲜的肠粘膜水。

(二)水要洁净,应尽量使用井水和蒸馏水。

(三)树脂的使用比例:在离子交换过程中,树脂的使用比例一般为肠粘膜水重量的2。5--3%,6小时吸附。

(四)树脂的贮藏:用过的树脂暂不用时,应进行1次酸碱酸处理,然后浸泡在21--22%的\食盐水中。

如何简单鉴别肝素的效价的高低及处理方法

一些客户把烘干好的肝素拿到收购厂家去销售,化验后得知质量不好,不能出售,回家再进行处理。这样,不仅浪费路费而且浪费时间,所以要学会简单鉴别肝素的质量好坏。

(1)把处理好脱好水的糊状肝素取5克烘干,假如尝其盐度小或无盐,硬度号,再将肝素用50毫升0。9%盐水溶解开,若溶液透明(微量下沉杂质不影响),再用50毫升95度酒精沉法,肝素呈颗粒状下沉且混合酒精液不呈乳白色浑浊,就说明此肝素效价100U/mg以上,糊状肝素可以烘干出售,否则不能烘干要究其原因重新溶解处理。

(2)若是肝素盐度大,要将糊状肝素,用等倍量的水溶解开,再用肝素液等倍量的90度酒精沉淀,重新脱水干燥。

(3)若是硬度小,100毫升酒精沉淀液呈乳白色浑浊就说明酸蛋白太多,要将糊状肝素用其体积5倍量的0。9%、45度盐水溶解开,用80--85度酒精重新沉淀、脱水、干燥即可。

(4)若是50毫升肝素液浑浊不透明且下沉的碱蛋白过多,应将糊状肝素用5倍量的4%的盐水溶解开,升温90度以上,静至,降温除杂抽出上清液,用酒精沉淀、脱水、干燥即可。

(5)若是鉴别时的各种现象都很好,而化验后的肝素质量不好,这就说明肝素中有肝素-蛋白复合物未彻底分离开(注:按我厂工艺生产此种现象少见)。

此种肝素处理方法是:将肝素用其体积的2倍5%的盐水溶解开,用碱调至PH值9.5然后缓慢升温至55度,保温4小时,然后用2当量的酸调至PH值7。5后再加热至95度,静至沉淀除杂,抽出上清液用酒精沉淀、脱水、干燥即可。


肠衣、肝素钠生产工艺

肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖,它与蛋白质结合在一起存在于肠粘膜、肺、肝等器官内,肝素与蛋白质分离提取后,具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多种生理活性,是防止动脉粥样硬化,心脑血管疾病的显效药物。

一、加工肠衣

1、洗肠,将收购的原肠清水洗净,再将肠内灌入适量的净水、浸泡待刮,浸泡时间以好刮为止。

2、刮肠,小肠组织由里向外分外粘膜层、粘膜下层、肌层和浆膜层。肠衣只留粘膜肌层和粘膜下层。刮肠之前,先将小肠固定在平整的刮板上,用竹刀均匀地刮去粘膜层和浆膜层,如有破洞,应从破洞处切开,同时将披头割去。

3、制把,精心测量长度,不可绷紧量尺,以100米为一把,每把不可超过16个节头,每节不短于2米。每把约用盐400克,腌渍2天后,取出沥干水,第二次再用盐300克,缸口要密封,储存在清洁,通风之处。湿度在80--90%,制成的肠衣色泽以白色,乳白色,粉红色品质最佳。

二、肝素钠生产工艺

1、盐解:将刮好的新鲜肠粘膜,每100斤肠粘膜加入清水100斤,按肠粘膜和水的总重量,加入4%的工业盐,搅拌均匀,再加烧碱液调PH值为8--9,缓慢升温50--55度,加温时每10--20分钟加水搅拌一次,恒温2小时,注重要间隔搅拌。恒温结束后,要快速升温到96--98度,恒温10分钟,趁热捞出上层的渣子。用100目尼龙布过滤。
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